Amplificación de una región del gen NS5 del virus fiebre amarilla mediante la técnica de transcripción inversa acoplada la reacción en cadena de la polimerasa

Abstract

La fiebre amarilla es una enfermedad viral aguda infecciosa perteneciente al grupo de las fiebres hemorrágicas, causada por un flavivirus de la familia Flaviviridae y se ha mantenido como un problema importante de salud pública en las áreas selváticas donde se trasmite entre los monos a través de la picadura de mosquitos del género Haemagogus y Aedes africanus y también en las áreas urbanas por Aedes aegypti. En este trabajo se planteó el diseño y estandarización de la RT-PCR para la amplificación de una región del gen NS5 del virus fiebre amarilla, en virtud de aportar una técnica molecular rápida y sencilla que permita la detección temprana del virus y como diagnóstico alternativo de la infección por fiebre amarilla. Para establecer las condiciones necesarias, se extrajo el ARN viral de cultivos celulares de células Vero que fue sometido a reacción de RT y posteriormente PCR, para lo cual se diseñó un par de cebadores NS5FV 8658(+) y NS5FV 9160(-); lográndose optimizar el ensayo con las siguientes condiciones: 0,8 mM MgSO4, 0,06 pmol de cebadores, 12 ng/µl de ARN y temperatura de hibridación de 610C. En geles de agarosa se observaron bandas únicas de amplificación del tamaño esperado (503 pb). Este método molecular demostró sensibilidad y especificidad para la detección del virus de la fiebre amarilla, esto lo convierte en un complemento esencial para una vigilancia epidemiológica y entomológica.