Análisis antigénico de epimastigotas de Trypanosoma Cruzi obtenidos en condiciones axénicas a 27ºc y 37ºc empleando sueros de pacientes chagásicos

Abstract

Epimastigotas (E) de Trypanosoma cruzi creciendo en cultivos axénicos a 27ºC se usan rutinariamente para diagnóstico. Epimastigotas de 37ºC sobrenadantes de cultivos celulares se consideran formas degenerativas de cultivos envejecidos procedentes de tripomastigotas o de amastigotas. El nivel de semejanza se desconoce por cuanto no se pueden separar de su estadio de procedencia. Con la obtención de epimastigotas derivados de amastigotas primarios fue posible solventar el problema. Nuestro objetivo fue comparar epimastigotas de 37ºC derivados de amastigotas extracelulares primarios (A) y epimastigotas de 27ºC, derivados de tripomastigotas (T) inducidos en medio axénico. Se trabajó con el clon T. cruzi (Dm28c) incubando los A a 37ºC y T a 27ºC, en ML15-HA. Se compararon los cambios morfológicos y poblacionales por recuento en cámara de Neubaüer y tinción con Giemsa. Los perfiles proteicos y glicoproteicos se analizaron por SDS-PAGE y tinciones específicas. Los cambios antigénicos mediante Inmunobloting con suero hiperinmune anti-epimastigotas (anti-E), anti-4estadios (anti-TEMA) y contra antígenos totales y fraccionados por electroelución usando pool de sueros de pacientes chagásicos agudos y crónicos. Nuestros resultados muestran que las cinéticas de transformación son diferentes según sea el estado de procedencia del epimastigota. Las transformaciones morfológicas están asociadas a cambios proteicos y glicoproteicos diferentes, relacionados con el estadio de procedencia y parece culminar morfológica y molecularmente en un epimastigota estándar surgido del cultivo axénico por tiempo prolongado. Mediante sueros hiperinmunes antiestadio se evidenció la existencia de antígenos epimastigota específicos asociados a la procedencia, esos antígenos parece no tener relevancia para usarlos en técnicas serológicas convencionales para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Abordajes inmunológicos más finos son necesarios para validar o descartar la utilidad de esos antígenos con fines diagnósticos. Sin embargo, es de interés analizar la dinámica a nivel proteómico que confirmen la condición de estadios de transición de estos epimastigotas.